大家好,今天来为大家分享bradford蛋白浓度测定试剂盒的一些知识点,和博士德bca蛋白定量试剂盒说明书的问题解析,大家要是都明白,那么可以忽略,如果不太清楚的话可以看看本篇文章,相信很大概率可以解决您的问题,接下来我们就一起来看看吧!
本文目录
一、请教Bradford法测定蛋白浓度原理及方法
解:是利用蛋白质-染料结合的原理,定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。试剂和仪器一、
染色液、BSA标准蛋白。BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml,-20℃保存。二、
测试样品待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。三、仪器96孔酶标、酶标仪。操作方法标准品编号12345678500ug/mlBSA/μl01.53612182430蒸馏水/μl3028.52724181260
分别于小离心管中混匀后,取20μl加入到对应酶标孔中待测样品编号9101112131415……待测样品稀释后,各取20μl加入到相应酶标孔中G250/μl200
用酶标仪测定A595nm处的吸光值。2.
根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。
二、(Bradford法)如何测定蛋白浓度
考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质浓度
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—250, 4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
纯的牛血清血蛋白,根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。
2.器材:(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器
100ug/ml标准蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl(ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 5
摇匀,1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐标轴上绘制标准曲线。
另取两支干净的试管(做一重复),加入合适浓度的待测样品,使其测定值在标准曲线的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
1、如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内测定光吸收,因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、若选择在旋涡混合器上混合,注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除。
三、(Bradford法)测定蛋白浓度的试剂盒叫什么
1、蛋白质定量试剂盒是根据目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法-考马斯亮蓝
2、G-250)法研制而成,实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度。其原理是考马斯亮蓝
3、在酸性条件下和蛋白质结合,使得染料最大吸收峰从
4、变为595nm,在一定的线性范围内,反应液
5、处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定
6、处吸光度的增加即可进行蛋白定量。本试剂盒含配制好的考马斯亮蓝染液和牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准溶液,测定范围为
bradford蛋白浓度测定试剂盒和博士德bca蛋白定量试剂盒说明书的问题分享结束啦,以上的文章解决了您的问题吗?欢迎您下次再来哦!